динамикалық BIOSENSORS heliX cyto толық автоматтандырылған зертханалық талдау жүйесі

Техникалық сипаттамалар

• Өнім атауы: heliX цито
• Өндіруші: Dynamic Biosensors GmbH
• Нұсқа: 1.0

Өнім туралы ақпарат

• heliX цито жүйесі флуоресцентті таңбаланған молекулалардың жасуша беттеріндегі нысандармен байланыстыру кинетикасын уақыт бойынша шешілетін тәсілмен өлшеу үшін бір жасушалық өзара әрекеттесу цитометриясына (scIC) арналған.

Өнімді пайдалану нұсқаулары

heliXcyto чипін пайдалану

• heliXcyto чипінде ұяшықтарды түсіру және өлшеу үшін электродтық нүктелері бар жалғыз микрофлюидтік арна бар. Чиптің дұрыс орналасуын қамтамасыз етіңіз және ұяшықтарды ұстау нұсқауларын орындаңыз.

Техникалық қызмет көрсету чипі

• Техникалық қызмет көрсету чипін тек тазалау, сынау және техникалық қызмет көрсету операциялары үшін пайдаланыңыз. Ластануды болдырмау үшін оны эксперименттер үшін пайдаланбаңыз.

Іске қосылған буфер

• Өлшеу кезінде Running Buffer 1 (RB 1) пайдаланыңыз. Толық ақпарат алу үшін негізгі нұсқаулықтағы scIC үйлесімділік парағын қараңыз.

Сенсорлық талдау

• Өлшеу кезінде heliOS бағдарламалық құралында нақты уақыт режимінде сенсорграмманы бақылаңыз. Кинетикалық жылдамдықтарды алу үшін уақыт бойынша флуоресцентті реакцияны талдаңыз.

Пассивация

• Чипте пассивация реагентін инкубациялау арқылы талданатын заттардың адсорбциясын болдырмау үшін қосымша қадам ретінде пассивацияны пайдалануды қарастырыңыз.

Нормализация

• Нормалау - салыстыру және талдау үшін деректерді стандарттау процесі. Пайдаланушы нұсқаулығына сәйкес қалыпқа келтіру процедураларын орындаңыз.

КІРІСПЕ

• Бұл нұсқаулық қысқаша қорытынды ретінде берілгенview heliXcyto жүйесінің және оның мүмкіндіктері. Барлық тараулар мына жерден табылған негізгі heliXcyto нұсқаулығында кеңейтілген https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

heliXcyto Терминологиясы бір жасушалы өзара әрекеттесу цитометриясы

• Бір жасушалық өзара әрекеттесу цитометриясы (scIC) флуоресцентті таңбаланған молекуланың (аналиттің) жасуша бетіндегі нысанаға (лигандаға) қосылу кинетикасын белгіленген уақытта флуоресцентті сигналды жазу арқылы өлшейтін технология.

Талдаушы

• Аналит - жасуша бетіндегі нысанаға қосыла алатын жылжымалы фазадағы флуоресцентті таңбаланған молекула.

Лиганд

• Лиганд» - heliOS бағдарламалық құралында талданатын зат байланыса алатын жасуша бетіндегі нысананы сипаттау үшін қолданылатын атау. Бұл рецептор молекуласы, липид, қант немесе жасуша бетінің басқа молекуласы болуы мүмкін.

Жасуша тұзағы

• Жасуша тұзақтары – heliXcyto чипіндегі ағын өткізгіш, биоүйлесімді полимерлі торлар. Олар ағын арнасында шамамен 6-дан 25 мкм-ге дейінгі әртүрлі өлшемді ұяшықтарды ұстауға және иммобилизациялауға арналған. Жасуша тұзақтары 3 түрлі өлшемде бар: шағын, орташа және үлкен.

heliXcyto чипі

• heliXcyto чиптерінде екі жағында саңылаулары бар жалғыз микрофлюидтік арна бар. Арнаның ортасында екі алтын электродты дақ орналасқан.
• Бір нүкте анықтамалық нүкте ретінде қызмет етеді, ал екінші нүкте жасушаны түсіру үшін 3D биоүйлесімді полимер торларын тасымалдайды және өлшеу нүктесі ретінде қызмет етеді. Өлшеу орнында бір типті 1 немесе 5 тұзақ болуы мүмкін.
• Анықтамалық нүкте жиналған флуоресцентті сигналға нақты уақытта сілтеме жасауға мүмкіндік береді. heliXcyto чипі қайта пайдалануға және бір рет пайдалануға болады.

Техникалық қызмет көрсету чипі

• Техникалық қызмет көрсету чипі – барлық тазалау, сынау және техникалық қызмет көрсету операциялары үшін пайдаланылатын бір арналы микрофлюидтік чип.
• Бұл әрекеттерге Тазалау және Ұйқы режимі, Ояну және Бастау режимі, Жүйені жуу және Флюидикалық сынақтар кіреді. Бұл чипті чиптің одан әрі ластануына жол бермеу үшін жасуша/ақуыз ерітінділерімен нақты эксперименттер үшін пайдаланбау керек.

Іске қосылған буфер

• Орындалатын буфер - өлшеу кезінде heliXcyto-да қолданылатын буфер. Әдетте Running Buffer 1 (RB 1) пайдалану ұсынылады.
• Қосымша ақпарат алу үшін негізгі нұсқаулықта табылған scIC үйлесімділік парағын қараңыз.

Сенсорграмма

• SCIC сенсорграммасы - бұл ұяшықтардағы немесе жасушалардағы өзара әрекеттесу прогресін бейнелейтін уақыт ішінде секундына есептелген (cps) флуоресценция реакциясының сызбасы. Бұл қисық болуы мүмкін viewөлшеу кезінде heliOS жүйесінде нақты уақыт режимінде ed.
• Сенсорграммаларды талдау кезінде байқалатын флуоресценттік іздерге ең жақсы сәйкес келетін экспоненциалды анықтайды және кинетикалық жылдамдықтар (кон, кофф) алынады.

Пассивация

• Пассивация - бұл микросхемаға пассивация реагенті енгізілетін және беттерді блоктау үшін инкубацияланатын қосымша қадам. Бұл талданатын заттардың чип материалдарына адсорбциясын болдырмауға көмектеседі.

Нормализация

• Әр өлшеу нүктесінен бөлек детектор арқылы сигнал жинауға байланысты сигналдардағы шамалы айырмашылықтарды есепке алу үшін қалыпқа келтіру қадамы қолданылады. Анықталған концентрациядағы флуоресцентті бояғыш (талданатын заттың ең жоғары концентрациясы мен таңбалану дәрежесіне негізделген) талдаудың басында енгізіледі. Бұл қалыпқа келтіру қадамы өлшеу әдісіне автоматты түрде қосылады және өлшенген қалыпқа келтіру шыңы нақты уақыттағы сілтеме жасау алдында деректерді талдау кезінде детекторлар арасындағы айырмашылықтарды автоматты түрде түзету үшін пайдаланылады.

scIC өлшеу принциптері

scIC қолданбалары

• Бір жасушалық өзара әрекеттесу цитометриясы (scIC) флуоресцентті таңбаланған талданатын заттың тікелей тірі жасушалармен тікелей байланысуы және оны ажыратуының кинетикалық жылдамдығын және жақындығын өлшейді.
• SCIC-те талданатын заттарды анықтау өлшемге тәуелсіз, сондықтан sub-nm-ден > 100 нм-ге дейінгі кез келген молекулаға қатысты және шағын молекулалардан, пептидтерден, аптамерлерден, нанободиялардан, аффиденелерден, антиденелерден, биспецификалық антидене пішімінен, ақуыздардан, вексоидтық комплекстерден (белоктардан, вексоидтық комплекстерден) барлық молекула кластарына қатысты. нанобөлшектер, вирустар.

scIC технологиясы келесі қолдану салаларын шеше алады:

• сигналды өлшеу ampбайланыстыру экрандарындағы литудалар
• кон және кофф жылдамдықтарының кинетикалық талдауы
• Кофф және екі фазалы сәйкестік үлгілері арқылы жақындық пен авидитті бағалау
• ерекшелік сынақтары
• жасуша бетіндегі мембраналық ақуыздардың салыстырмалы сандық көрсеткіші
• эпитопты байланыстыру және бәсекелестік зерттеулер
• тежеу ​​талдаулары
• мақсатты белоктардың интериализациясын бағалау

heliXcyto аппараттық мүмкіндіктері

Сұйықтық жүйесі

• heliXcyto сұйық жүйесі 3 түрлі буферлік бөтелкеге ​​дейін қоректенеді, бұл іске қосу және техникалық қызмет көрсету буферінің өзгеруіне мүмкіндік береді. HeliXcyto жүйесіндегі сорғыларды әр түрлі жағдайларға жауап беретін 20 мен 500 мкл/мин арасындағы ағын жылдамдығына орнатуға болады.ampжәне талдауға қойылатын талаптар. Чиптің ағындық арнасы екі саңылау арқылы сұйық жүйеге қосылады. Сол жақ саңылау s-ге қосылғанample, буфер және жуу сызықтары, ал оң жақтағы саңылау регенерация сызығымен байланысты.
• Бұл екі жақты сұйық жүйе өлшеудің әр түрлі қадамдарын орындау кезінде тұрақты ұяшықтарды түсіруге және талдау кезінде чипті қайта пайдалану мүмкіндігі үшін чипті қалпына келтіруге мүмкіндік береді.
• 1-сурет. Fluidic жүйесінде чиптерді біріктіру

Оптикалық жүйе

• Флуоресценция сигналы қызыл және жасыл жарық шығаратын диодтармен (жарық диодтары) қозғалады және арнаның толық тереңдігі бойынша әрбір нүктеден қызыл және жасыл сигналдарды жинайтын төрт бір фотонды есептегіш арқылы анықталады.
• Екі тәуелсіз сигналды бір өлшеу орнында бір уақытта бақылауға болады, бұл қос түсті талдау қондырғысында екі өзара әрекеттесуді бірден өлшеуге мүмкіндік береді.
• 2-сурет. Оптиканы орнату
• Әрбір өлшеу нүктесінен сигнал жинау бөлек детектормен өңделеді, бұл өңделмеген сандарда шамалы айырмашылықтарға әкелуі мүмкін. Мұны есепке алу үшін қалыпқа келтіру қадамы деректерді генерациялайтын талдауларға автоматты түрде қосылады.
• Бір фотонды есептегіштерден басқа, құрал ПЗС камерасымен және шағылысқан жарық микроскопымен жабдықталған. Бұл құралдар нақты уақыт режимінде ұяшықты бейнелеуге мүмкіндік береді, бұл өлшеу кезінде жасуша тұтастығы мен талданатын заттың сапасын бағалауға мүмкіндік береді.
• Бұл біріктірілген орнату тәжірибені жан-жақты бағалауды қамтамасыз ете отырып, өзара әрекеттесулерді де, биологиялық жағдайларды да бақылауды қамтамасыз етеді.

scIC жұмыс процесі

SCIC өлшеу процесін 3 негізгі қадамға бөлуге болады

1. heliOS жүйесіндегі эксперименттік дизайн: Әрбір өлшеу heliOS бағдарламалық құралында экспериментті жобалаудан басталады. Талдау жұмыс процесі алдын ала анықталған әдістерді таңдау және пайдаланылған ұяшық сызығы, талданатын зат концентрациясы және буфер шарттары сияқты эксперименттік параметрлерді реттеу арқылы орнатылады. heliOS автоматты түрде жасушалардың, талдағыштардың, буферлердің және өлшеуге қажетті басқа ерітінділердің нақты мөлшерін есептеп, дайындық процесін оңтайландырады.
2. Буферлерді, талдағыштарды және жасушаларды дайындау: Эксперименттік жобаны аяқтағаннан кейін қажетті материалдар heliOS ұсынған спецификацияларға сәйкес дайындалады. Буферлер, талдағыштар және ұяшықтар аспаптың автокөлігіне жүктеледіampлер.
3. Өлшеу және деректерді талдау: Жүйе пайдаланушының қосымша араласуын қажет етпейтін нақты уақыттағы автоматтандырылған өзара әрекеттесу өлшеулерінің жоспарланған сериясын орындайды. Нәтижелер туралы дереу түсінік алу үшін өлшеу әлі орындалып жатқанда деректерді талдауға болады.

heliOS жүйесіндегі scIC талдаулары

Деректерді генерациялайтын талдаулардан басқа, бағдарламалық құрал чиптерді сынау, тазалау және құралға техникалық қызмет көрсету әдістерін де қамтамасыз етеді.

Кесте 1. Тексерілген деректерді генерациялайтын талдаулар

scIC кинетикасы	1 және 5 концентрациялар арасында реттелетін талданатын байланысы бар жасушаларда толық кинетиканы өлшейді, содан кейін ең жоғары концентрациядан кейін бір рет диссоциацияланады. Жасыл немесе қызыл арна. Тек Analyte сынағы опциясын қамтиды.
scIC Kinetics – Қос түсті	1 және 5 концентрациялар арасында реттелетін талданатын байланысы бар жасушаларда толық кинетиканы өлшейді, содан кейін ең жоғары концентрациядан кейін бір рет диссоциацияланады. Жасыл және қызыл арна бір уақытта қосылды. Тек Analyte сынағы опциясын қамтиды.
scIC диссоциациясы – қос түсті	Жасыл және/немесе қызыл арнасы бар флуоресцентті таңбаланған талданатын затпен алдын ала инкубацияланған жасушалардан талданатын заттың диссоциациясын өлшейді.

SCIC өлшеуге дайындық және талдауды әзірлеу

SCIC өлшеуін орнатпас бұрын бірнеше тармақты ескеру қажет

• Аналит концентрациясы, таңбалау дәрежесі, қасиеттері және сапасы.
• Нормализация ерітіндісі және қозу күші.
• Жасушаның сапасы және оны өңдеу.

Аналиттің концентрациясы және таңбалану дәрежесі

• Стандартты кинетикалық өлшеу тәжірибелеріне сәйкес, біз көп концентрация кинетикасы үшін күтілетін тепе-теңдік диссоциация константасының (Kd) 0.1-10x аралығындағы талданатын заттың молярлық концентрация диапазонын таңдауды ұсынамыз. Бір концентрациялы кинетика немесе диссоциацияны өлшеу үшін талданатын заттың концентрациясы күтілетін Кд 1x және 10x арасында болуы керек. 25 мкл/мин ағын жылдамдығымен 10 минуттық байланыстыру уақыты үшін есептелген қажетті талданатын зат көлемі шамамен 300 мкл құрайды.
• Талданатын зат үшін таңбалау дәрежесі (DOL) ең дұрысы 1 болуы керек, бірақ 2 немесе 3 DOL мәндері әлі де қолайлы. Дегенмен, талданатын заттағы белгілердің көп болуы оның байланыстыру қасиеттеріне әсер етуі мүмкін және агрегация немесе нақты емес байланыстыру ықтималдығын арттыруы мүмкін екенін ескеріңіз. Оңтайлы DOL қол жеткізу үшін heliXcyto реагенттер желісіндегі қызыл немесе жасыл бояуы бар таңбалау жинақтарымен бірге берілген хаттаманы орындаңыз.
  Нормализация
• Нормалау барлық деректерді жасау әдістерінің бірінші қадамы болып табылады. Ол әрбір өлшеу нүктесі үшін бөлек детекторларды пайдаланудан туындаған шамалы сигнал ауытқуларының орнын толтырады. Бұл қадамда талдаудың басында пайдаланушы анықтаған концентрациядағы флуоресцентті бояғыш енгізіледі.
• Қалыптастыру ерітіндісінің концентрациясы өлшеу кезінде қолданылатын флуоресцентті таңбаланған аналиттің ең жоғары концентрациясын талданатын заттың таңбалау дәрежесіне (DOL) көбейту арқылы есептеледі. Бұл концентрация өлшеу кезінде қолданылатын жарық диодты қоздыру қуатын бағыттайды. Мақсат - Нормализация шешімі шыңының шамамен бірдей флуоресценция сигналына жетуі ampлитуда анықталатын заттың ең жоғары концентрациясы ретінде.
• Бастапқы мәндерді орнату үшін негізгі нұсқаулықтағы Нормализация ерітіндісінің концентрация диаграммасын қараңыз. Диаграмма бастапқы параметрлерді бағыттайтынын ескеріңіз, бірақ жарық диодты қоздыру қуатын талдауды әзірлеу кезінде одан әрі реттеуге болады.

Жасушаның сапасы және дайындалуы

• Жасушаның өміршеңдігі 95% жоғары болуы керек, ал жасушалар әдетте жақсы жағдайда болуы керек. Жабысқақ жасушалар үшін 50-70% біріктірілген жасушалармен жұмыс істеуді ұсынамыз.
• Суспензия жасушалары үшін өсудің орта бөрене фазасында жинауды ұсынамыз. Бір іске қосу үшін 1E+06 ұяшық/мл 50 мкл жасуша суспензиясы қажет.

Суспензия жасушаларын жинау

1. Центрифуга шамамен. 2E+06 ұяшықтары 300 г-да 7 минут ішінде жасуша культурасын алып тастау үшін. Супернатантты тастаңыз.
2. Жасуша түйіршіктерін шамамен қайта суспензиялау арқылы жасушаларды бір рет жуыңыз. 1 мл DPBS. Тірі жасушаларды түйіршіктеу үшін суспензияны 400 г 5 минут бойы центрифугалаңыз. Фрагменттерді және медианы алып тастау үшін үстіңгі затты абайлап тастаңыз.
3. 1 мл DPBS-де ақырын қайта суспензия, суспензияны жасуша сүзгінің үстіне ауыстырыңыз және суспензияны гравитация ағынымен сүзіңіз.
4. Штаммдалған суспензияның жасуша концентрациясын өлшеңіз және 1E+06 ұяшық/мл дейін реттеңіз.
   • КЕҢЕС: Кейбір суспензия жасушалары кластерлер түзуге бейім. Кластерлерді ақырын қайта суспензиялаңыз және бірінші центрифугалау қадамының алдында штамм қадамын қосыңыз.
   • Тасымалдау немесе қайта суспензия кезінде жоғары ығысу күштерін болдырмау үшін ұяшық суспензияларымен жұмыс істегенде кең саңылаулы тамшуыр ұштарын пайдаланыңыз.

Жабысқақ жасушаларды жинау

1. Стерильді DPBS көмегімен жасушаларды жуыңыз.
2. Қалаған диссоциациялау реагентін (мысалы, TrypLE) пайдаланып культура колбасынан жасушаларды ажыратыңыз.
3. Диссоциацияланған жасушаларды ортаның қолайлы көлеміне қайта суспензия және 30 нм жасуша сүзгісімен сүзіңіз.
4. Міндетті түрде, қатты жабысқан жасушалар болған жағдайда ЭДТА қосыңыз (соңғы концентрациясы 5 мМ).
5. Жасуша культурасын алып тастау үшін жасушаларды 300 г 7 минут бойы центрифугалаңыз. Супернатантты тастаңыз.
6. Ұяшықтарды 1 мл DPBS дейін қайта суспензиялаңыз.
7. Жасуша концентрациясын өлшеңіз және 1E+06 ұяшық/мл дейін реттеңіз.
   • КЕҢЕС: DPBS-пен 1:4 сұйылтылған жасушалық ортаны жасушаларға қоректік заттарды қосу үшін пайдалануға болады.ampсезімтал ұяшықтар немесе ұзақ талдау жұмыс үрдісі жағдайында.

Жасушаны бекіту

1. Жасуша культурасын алып тастау үшін 10E+06 ұяшықтарын 300 г-да 7 минутқа дейін центрифугалаңыз. Супернатантты тастаңыз.
2. Жасуша түйіршіктерін 1 мл PBS ішінде қайта суспензиялаңыз, центрифугалаңыз және үстіңгі затты тастаңыз.
3. Жасуша түйіршіктерін 500 мкл PBS/2% PFA (62.5 мкл 16% PFA ерітіндісі + 437.5 мкл PBS) ішінде қайта суспензиялаңыз.
4. Жасушаларды бөлме температурасында 10 минут бойы инкубациялаңыз (үзік-үзік жұмсақ шайқаумен).
5. 500 мкл PBS қосыңыз және PFA-ны алу үшін суспензияны 400 г 5 минут бойы центрифугалаңыз.
6. Супернатантты тастаңыз.
7. Жасушаларды 1 мл PBS ішінде қайта суспензиялаңыз, 30 мкм жасуша сүзгісі арқылы сүзіңіз, центрифугалаңыз (400 г, 5 мин) және үстіңгі затты тастаңыз.
8. Ұяшықтарды шамамен 1 мл PBS ішінде қайта суспензиялаңыз (міндетті емес: 5E+06 ұяшық/мл соңғы концентрациясына реттеңіз).
9. Бекітілген жасушаларды 2-8°C температурада сақтаңыз, бір ай ішінде қолданыңыз.
   • Егер көбірек ұяшықтарды бекіту керек болса, барлық сомаларды сәйкесінше үлкейтіңіз.
   • ЕСКЕРТУ: Жасушаларды жинау кезінде центрифугалау жылдамдығын, егер жасушалар сезімтал болса және әдетте төменгі g-күштері қолданылса, жасуша түріне реттеуге болады.
   • PFA концентрациясы 0.5 және 4% аралығында өзгеруі мүмкін.

scIC талдау орнату

Келесі SCIC талдаулары талдауды әзірлеуге қосылуы керек және кейінірек талдау жұмыс үрдісінде қайталануы мүмкін.

Талдауды әзірлеу жұмыс процесі 3 нақты қадамға бөлінеді:

1. Циточип сынағы
2. Тек талдаушы сынағы
3. Кинетикалық талдау

Циточип сынағы

• Өлшеуде циточипті қолданбас бұрын жаңа чиптің сапасын бағалау қажет. Cyto чип сынамасын бөлек іске қосу арқылы бастаңыз. Чип сынағын орнату және бағалау туралы негізгі нұсқаулықтағы Helix cyto чипі тарауын қараңыз.

Тек талдаушы сынағы

• SCIC талдауын әзірлеу жасушалары жоқ жаңа чип бетіндегі флуоресцентті таңбаланған талданатын заттардың әрекетін бағалайтын Тек аналиттік сынақтан басталады.
• Бұл сынақты таңбаланған талданатын заттардың тұрақтылығын бағалау үшін мерзімді түрде қайталауға болады. Тек қана scIC Analyte Testын Кинетика талдауларында Ұяшық параметрлері астындағы Тек талдаушы құсбелгісін қосу арқылы конфигурациялауға болады.
• Талданатын заттың сапасын бағалау үшін ең жоғары пайдаланылған концентрация жеткілікті және оны талдаудағы бірлестіктердің біреуінен басқасының барлығын өшіру арқылы конфигурациялауға болады.

Kinetic Assay жұмыс үрдісін орнату

• Кинетикалық талдау әдетте деректерді жасайтын талдауларды, сондай-ақ техникалық қызмет көрсету элементтерін қамтитын автоматтандырылған жұмыс процесінде пайдаланылады. Талданатын зат тек сапаны бақылаудан өткеннен кейін, оны ұяшықтарды өлшеуде пайдалануға болады.
• Кинетикалық жылдамдықтарды сенімді түрде сандық түрде анықтау үшін байланыс кезіндегі сигнал реакциясы концентрацияға тәуелді болуы керек, аналиттің жоғары концентрациясымен артады.
• Ең жоғары концентрация платоға жетуі керек, бұл байланыс тепе-теңдік күйіне жеткенін көрсетеді. Қисық сызығының сенімді сәйкес келуін қамтамасыз ету үшін байланысқан талданатын заттың маңызды бөлігін (5%-дан астам) ажырату үшін диссоциацияны жеткілікті ұзақ орындау қажет.
• Бастапқы нүкте ретінде талдау шарттарында әдепкі параметрлерді пайдаланыңыз және нәтижелерге байланысты әрі қарай реттеңіз.

Example 1. Ұсынылатын талдау жұмыс процесі

Талдау жұмыс процесі пайдаланушыларға нақты эксперименттік қажеттіліктерге негізделген өлшеу және техникалық қызмет көрсету әдістерін кезекке қоюға мүмкіндік береді.

Талдау жұмыс процесі көрсетілген ретпен келесі қадамдарды қамтуы мүмкін:

1. Prime (Қызмет көрсету чипі)
2. scIC кинетикасы (A ұяшықтары, A аналиті, циточип)
3. Жүйені жуу (Қызмет көрсету чипі)
4. scIC кинетикасы (Cells B, Analyte A, Cyto чипі)
5. Жүйені жуу (Қызмет көрсету чипі)
6. Тек қана талдаушы конфигурацияланған scIC Kinetics (Analyte A, Cyto чипі)
   • Бастау және Жүйені жуу қадамдары техникалық қызмет көрсету чипінде орындалады. Жүйені жуу басқа ұяшық сызығына ауысқанда және жұмыс процесінің соңында тек талданатын элементті тексеруден бұрын қосылады.
   • Қосымша мәліметтер алу үшін негізгі нұсқаулықтағы Cyto жүйесін жуу бөлімін қараңыз.
   • Жасушаларда кинетикалық талдауларды кезекке қою кезінде жасуша сызығына тәуелді жасушаның өміршеңдігін ескеріңіз.
   • Сезімтал ұяшық сызықтары үшін талдаудың жұмыс үрдісіне тек 1-2 талдауды орындау ұсынылады. Неғұрлым серпімді ұяшық сызықтары үшін қосымша талдауларды кезекке қоюға болады.
   • ЕСКЕРТУ: Қосымша талдаулар үшін жасушаларды басқаша атау арқылы бөлек құтыларда жасуша ерітіндісін дайындаңыз.
   • Барлық реагенттердің жаңа екеніне және 0.22 мкм сүзгі арқылы сүзілгеніне көз жеткізіңіз. Соңында, heliOS нұсқауы бойынша дайындалған реагенттерді құралға салыңыз.
   • Іске қосуды көк көрсеткі «Орындау» белгішесін басу және талдауды бастау шеберіндегі қадамдарды орындау арқылы бастауға болады.
   • Іске қосу басталғаннан кейін құрылғы бүкіл талдау жұмыс процесі аяқталғанша дербес жұмыс істейді.

SCIC эксперименттерін талдау

scIC талдау жұмыс процесі

• scIC деректері heliXcyto чипінің бетінде түсірілген ұяшықтарда орын алатын оқиғалардың табиғи күрделілігіне байланысты стандартты биосенсор деректерінен өзгеше болуы мүмкін, бұл сенсорграмманың бұзылуына әкелуі мүмкін.
• Сондықтан әрбір өлшеу қадамында түсірілген кескіндер үшін және автоматтандырылған талдаудың бастапқы бетінде жасалған сенсорграммалар үшін сапаны бақылауға ерекше мән беріледі.
• Сонымен қатар, heliOS scIC деректерін қолмен талдау кезінде сенсорграммадағы бұзушылықтарды жоюға арналған құралдарды ұсынады.

SCIC деректерді талдау процесі:

1. Суретті тексеру:
   • Өлшеу барысында түсірілген барлық кескіндерді тексеріңіз (тәжірибе терезесіндегі кескіндер қойындысы).
   • Бүкіл өлшеу кезінде қанша жасуша тұзақтарда тұрақты болды?
   • Жасушалардың күйі қандай? Түйіршікті және жасуша тұтастығын тексеріңіз.
   • Қалпына келтіру қадамынан кейін қақпандар таза ма?
2. Шикі деректерді тексеру:
   • Анықтамалық нүкте 1 және өлшеу нүктесі 2 үшін бастапқы деректерді тексеріңіз
   • Қалыпқа келтіру шыңының сигналы ең жоғары бастапқы деректер сигналына жақын немесе одан жоғары болуы керек.
   • Сигнал екі нүктеде де бастапқы деңгейге оралады ма, әлде нақты емес байланыстырудың дәлелі бар ма?
3. Нормаланған деректерді тексеру:
   • 1 және 2 нүкте үшін инъекция секірулері дұрыс қабаттастырылған ба?
4. Анықтамалық деректерді тексеру:
   • Регенерация қадамы сигналды бастапқы деңгейге қайтарады ма? Олай болмаса, регенерациядан кейін қақпақтарда жасушалардың немесе қоқыстардың бар-жоғын қайта арқылы тексеріңізviewбейнелерді қабылдау.
   • Сілтеме берілген қисықтарда өсулер, шектен шығулар немесе басқа бұзушылықтар бар ма? Олай болса, қайтаview ықтимал себептерді анықтау және қолмен реттеулерді қарастыру үшін суреттер.
5. Деректер сәйкестігін тексеру:
   • Көрнекі сапаны бағалауды орындау
   • Сәйкестік қисықтардың әрекетін дәл сипаттай ма, әлде сәйкестік сызығы сенсорграмманы қиып өте ме?
   • Сәйкестік деректердің қисықтығын дұрыс сипаттай ма?
   • Бұл ampсілтеме берілген деректерге сәйкес келетін литуда?

scIC автоматтандырылған деректерді талдау

• SCIC автоматтандырылған талдауы бірнеше рет басу арқылы бастапқы деректерді сапаны бақылау учаскелеріне және орнатылған деректерді өңдейді.
  1. Эксперимент тізімінде таңдалған экспериментті екі рет басу арқылы scIC тәжірибесін ашыңыз
  2. Эксперимент қойындысының төменгі жағындағы үлкен көк «Талдау» түймесін басыңыз.
  3. Эксперимент жұмыс үрдісінен талдағыңыз келетін талдауды таңдаңыз.
  4. Қол жетімді талдау түрлерінің ішінен Kinetics scIC таңдаңыз және «Келесі» түймесін басыңыз.
     • ЕСКЕРТУ: Тәжірибе әлі орындалса, тізімде тек аяқталған талдаулар көрсетіледі. Талдау таңдалғаннан кейін келесі терезеде қолданылатын әдіс/талдау үшін тән барлық қолжетімді талдау түрлері көрсетіледі.
  5. Қажет болса, талдауды келесі терезеде конфигурациялаңыз. Әдепкі сәйкестендіру үлгісі «Кинетика – бос соңғы деңгей» болып табылады, «Соңғы деңгейді нөлге мәжбүрлеу» құсбелгісі қосылған. Егер биология немесе деректер күрделірек сипаттаманы қажет ететін болса ғана, осы үлгіден ауытқу.
  6. Конфигурацияны аяқтағаннан кейін, барлық алынған суреттерді, өңделмеген және өңделген сенсорграммаларды және кинетика мәндерін көру үшін Талдау түймесін басыңыз.
• s тән күрделілігіне байланыстыampSCIC талдаулары үшін пайдаланылған сызбалар нәтижесінде алынған сенсорграммаларда бұзушылықтар болуы мүмкін.
• Мұны шешу үшін автоматтандырылған талдауда суреттер мен сенсорграммалардың сапасын бақылауға баса назар аударылады.
• Қолмен түзетулер немесе тереңірек талдау қажет болса, артефакттарды түзетуге арналған құралдар қолмен талдау Scratchpad ішінде беріледі.

heliXcyto техникалық қызмет көрсету және залалсыздандыру

• heliXcyto техникалық қызмет көрсету құралының оңтайлы өнімділігі мен ұзақ қызмет ету мерзімін қамтамасыз ету үшін өте маңызды. Тұрақты күтім ластануды болдырмайтын және жүйенің тұтастығын сақтайтын, дәл нәтижелер мен біркелкі жұмыс істеуге мүмкіндік беретін тазалау процедураларын қамтиды. Тұрақты күтім құралдың сенімділігі мен эксперимент нәтижелерінің сапасы үшін маңызды.
  heliXcyto техникалық қызмет көрсету екі негізгі процедураны қамтиды: талдаудың жұмыс процесіне тікелей біріктірілуі мүмкін Cyto System Wash және алдыңғы ұзағырақ түнгі өлшеуден кейін немесе 2 күннен артық пайдаланбаған кезде құралды пайдалану алдында тікелей күту үшін бөлек режим ретінде орындалатын Clean & Sleep.
• Жүйені жуу және тазалау және ұйқы режимінің екеуі де чип науасында heliX® техникалық қызмет көрсету чипінің болуын талап етеді.

Таза және ұйқы режимі

• Тазалау және ұйқы режимі тазалау және құрылғыны өшіру/сақтау үшін арналған. Әдіс heliX® құрылғысының сұйық түтіктерін алдымен аса таза сумен, содан кейін 70% этанолмен шаяды. Соңында барлық түтіктер ауамен желдетіледі.
• Бұл тазалау процедурасы толығымен автоматтандырылған және шамамен 40 минутты алады. Процедура барысында этанол су бөтелкесіне шығарылады, сондықтан бөтелкенің мазмұнын кейін тастау керек.
• Тазалау және ұйықтау режимінен кейін құрал ұйқы режиміне өтеді және ояту және бастапқы режим орындалмайынша оны пайдалану мүмкін емес. HeliX® техникалық қызмет көрсету чипі екі жұмыс үшін де қажет.
• МАҢЫЗДЫ: Түтіктің ластануын болдырмау үшін, тазалау процедурасынан кейін су бөтелкесінің ішіндегісін (су/этанол қоспасы) лақтырыңыз және қоқыс контейнерін босатыңыз.

Өшіру және ұзақ сақтау

• Ұзақ уақыт бойы пайдаланбау үшін «Тазалау және Ұйқы» процедурасынан кейін құрамында су мен этанол бар бөтелкені буфер науасынан шығарып, түтікшені ауаға ашық қалдырыңыз.
• Сондай-ақ, heliX® техникалық қызмет көрсету чипін алып тастап, түпнұсқа сөмкесінде сақтаңыз. Бұл кері ағынды және ластануды болдырмайды. Құрылғыны өшіру.

Цито-жүйені жуу

• heliXcyto System Wash шамамен 45 минут ішінде тазалау ерітіндісі 3 (CS3) көмегімен микрофлюидтік жүйені толық тазартады. CS3 екі секундта алынадыtages. Бірінші ине және сampілмек толтырылады және кез келген ластаушы заттарды кетіру үшін инкубацияланады.
• ЕСКЕРТУ: Құрылғы пайдаланылып тұрғанда, Cyto System Wash қолданбасын кем дегенде күн сайын іске қосыңыз. Cyto System Wash әдісін талдау жұмыс процесіне әрбір талдаудан кейін (жаңа ұяшық сызығына ауысқанда немесе sampсапасы оңтайлы емес) немесе талдау жұмыс процесінің соңына дейін. Чип науасында Регенерациялар саны ретінде көрсетілген максимум 50 Cyto System жуудан кейін техникалық қызмет көрсету чипін ауыстырыңыз view Құрылғыны басқару.

Байланыс

• Dynamic Biosensors GmbH
• Perchtinger Str. 8/10
• 81379 Мюнхен
• Германия
• Bruker Scientific LLC
• 40 Мэннинг жолы, Мэннинг саябағы
• Биллерика, MA 01821

АҚШ

• Тапсырыс туралы ақпарат order.biosensors@bruker.com
• Техникалық көмек support.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• Құралдар мен чиптер Германияда жасалған және өндірілген.
• ©2025 Dynamic Biosensors GmbH
• Тек зерттеуге арналған. Клиникалық диагностикалық процедураларда қолдануға болмайды.

Жиі қойылатын сұрақтар

scIC жиі қойылатын сұрақтар

heliXcyto чипін қайта пайдалана аламын ба?

Иә, heliXcyto чипі қайта пайдалануға және бір рет пайдалануға болады. Тиісті тазалау және сақтау нұсқауларын орындаңыз.

Техникалық қызмет көрсету чипінің мақсаты қандай?

Техникалық қызмет көрсету чипі жүйенің дұрыс жұмыс істеуін қамтамасыз ету үшін тазалау, сынау және техникалық қызмет көрсету операциялары үшін пайдаланылады.

Құрылғыны қаншалықты жиі тазалауым керек?

heliXcyto сұйық жүйесі Cyto System Wash және Clean&Sleep әдістерімен таза ұсталады. Микрофлюидтік жүйені әр талдаудан кейін (әсіресе ұяшық түрін өзгерткен кезде) немесе талдау жұмыс процесінің соңында ең соңғысы техникалық қызмет көрсету чипіндегі Cyto System Wash арқылы тазалау ұсынылады. Clean&Sleep процедурасы алдыңғы ұзақ өлшеуден кейін (мысалы, түнгі тәжірибеден кейін таңертең) немесе heliXcyto өшіру 2 күннен артық пайдаланылмайтын кезде тікелей қолданар алдында қолданылуы керек.

Құрылғыда ерітінділерді қанша уақыт сақтауға болады: RB 1 / су/ CS 1 / CS 3 / Нормализация ерітіндісі?

Әдетте, әрбір өлшеу алдында барлық ерітінділер қалған көлемге және ықтимал бұлыңғырлыққа немесе жауын-шашынға тексерілуі керек. Мұндай жағдайда ерітіндіні дереу ауыстыру керек. Су мен RB 1 күн сайын ауыстырылуы керек, ал RB 1 әрбір өлшеу алдында сүзгіден өтуі керек. Сұйылтылған Нормализация ерітіндісін 2 күн қатарынан қолдануға болады. Тазалау ерітінділері шамамен 3 күн бойы тұрақты.

heliXcyto чипін қанша уақыт пайдалана аламын?

heliXcyto чипінің жарамдылық мерзімін heliOS жүйесіндегі Құрылғы бөліміндегі Чип науасы қойындысында тексеруге болады. Жарамдылық мерзімі өткеннен кейін чиптің тұтастығына кепілдік берілмейді. Соған қарамастан, тұзақтар тұрақты, беті таза және флуоресценциялық фон чип сынауында көрсетілген кесу шегінен төмен болса, чип өлшеу үшін жарамды болып саналады. Үнемі сыртқы чипті тазалау (чипті тазалау жинағы CCK-1-1 чиптің қызмет ету мерзімін едәуір ұзарту үшін чипті пайдаланғаннан кейін орындау ұсынылады.

Техникалық қызмет көрсету чипін қанша уақыт пайдалана аламын?

Техникалық қызмет көрсету чипін Жүйені 50 рет жуудан кейін ауыстыру қажет (heliOS жүйесінде Құрылғыны басқарудың Чип науасы қойындысындағы регенерациялар ретінде есептеледі).

heliXcyto чип сынағы қаншалықты жиі орындалуы керек?

Чип сынағы жаңа экспериментті бастамас бұрын флуоресценция фоны, тазалығы және чиптің тұтастығы туралы ақпаратты жинайды. Оны жаңа чип пайдаланылған кезде кем дегенде бір рет орындау керек, бірақ чиптің күйін тексеру үшін әрбір эксперименттің алдында немесе басында орындау ұсынылады. Бұл өлшеу шарттарын реттеуге және чипте немесе құрылғыда сенсорграммалардағы ауытқуларды байқауға мүмкіндік береді.

Аналитті таңбалау химиясы дегеніміз не?

Сәйкесінше қызыл немесе жасыл флуоресцентті бояғыш біздің таңбалау жинақтары арқылы NHS-эфирлері арқылы ақуыз анализіндегі бастапқы аминдерге (мысалы, лизиндер немесе N-терминус) қосылады. Мәліметтерді және ақаулықтарды жою бөлімін біздің heliXcyto таңбалау жинағы қызыл бояу (Таңдау жинағы қызыл бояу 2 CY-LK-R2-1) және heliXcyto таңбалау жинағы жасыл бояу (таңбалау жинағы жасыл бояу CY-LK-G1-1) нұсқаулықтарынан табуға болады. webдүкен.

heliOS тіркелгі деректерін және лицензия туралы ақпаратты қайдан табуға болады?

Тіркелгі деректері мен лицензия ақпаратын енгізу процесі heliXcyto нұсқаулығындағы heliOS орнату бөлімінде сипатталған. webсайт (heliXcyto нұсқаулығы). Лицензия туралы ақпарат heliXcyto ДК жұмыс үстеліндегі scIC қалтасында сақталуы керек, оны біздің Қолданбалар жөніндегі маман жаттығу кезінде жасаған.

HeliXcyto қозу/шығару диапазондары қандай?

Қызыл түсте қозу 605-625 нм, эмиссия (анықтау) 655-685 нм. Жасыл түсте қозу 490-510 нм, жасыл түсте эмиссия 525-575 нм.

Статистикалық сенімділік үшін бір тәжірибені қанша рет өлшеуім керек?

Сенімді орташа кинетикалық жылдамдықтарға қол жеткізу үшін біртекті жасуша популяциясында 3-концентрациялы кинетикалық өлшемдердің 3-4 қайталануын орындау ұсынылады. Тұрақты деректер жинағында көшірмелердің ассоциациясы және диссоциациялану жылдамдығы 2-4 еселік терезе ішінде болуы керек.

SIC өлшемдерінің сезімталдығы қандай?

Мақсатты экспрессия тұрғысынан анықтаудың төменгі шегі талданатын заттың таңбалануына байланысты, бірақ әдетте scIC бір ұяшыққа 1000-10000 молекулаға дейін кинетиканы өлшей алады. Сезімталдықты арттыру үшін кемінде 5 ұяшықты түсіру ұсынылады, ал талданатын DOL 5-10 және жарық диодты қуаты максималды флуоресценция санына жету үшін теңестірілуі керек.

Кинетикалық жылдамдықтар бойынша heliXcyto анықтау шектері қандай?

Ең соңғы техникалық шектеулерді heliXcyto нұсқаулығында (heliXcyto нұсқаулығында) табуға болатын heliXcyto техникалық сипаттамаларын қараңыз. Диссоциация константасы Kd: 10 pM - 1 мМ Қауымдастық жылдамдығы константасы kon: 1E3 - 1E7 M-1s-1 Диссоциация жылдамдығы тұрақты koff: 1E-6 - 1 с-1 Толық ақпарат алу үшін біздің heliXcyto нұсқаулығын қараңыз. webсайт.

Құжаттар / Ресурстар

динамикалық BIOSENSORS heliX cyto толық автоматтандырылған зертханалық талдау жүйесі [pdf] Пайдаланушы нұсқаулығы heliX cyto толық автоматтандырылған зертханалық талдау жүйесі, heliX cyto, толық автоматтандырылған зертханалық талдау жүйесі, автоматтандырылған зертханалық талдау жүйесі, зертханалық талдау жүйесі, талдау жүйесі, жүйе

Анықтамалар

• Пайдаланушы нұсқаулығы